Identifiant pérenne de la notice : 206023499
Notice de type
Notice de regroupement
Note publique d'information : La taline est une protéine multifonctionnelle du cytosquelette qui joue un rôle important
dans la connexion du cytosquelette d’actine à une famille de récepteurs membranaires
d’adhésion, les intégrines. La taline contient deux sites d’interaction avec les intégrines,
un premier au niveau de son domaine globulaire et un deuxième au niveau de son domaine
élongé. L’objectif de ce travail de thèse de doctorat était de caractériser le site
d’interaction du domaine élongé de la taline avec l’intégrine aIIbb3, au niveau structural
et fonctionnel, et de définir la séquence minimale d’interaction. Pour atteindre ce
but, trois approches différentes ont été choisies!: i) une approche bioinformatique
d’analyse de séquence, ii) une approche cellulaire in vivo, étudiant a)la localisation
subcellulaire de fragments recombinants de la taline, fusionnés à DsRed, dans des
cellules CHO aIIbb3-GFP et b) l’interaction de ces fragments avec l’intégrine par
la technique du FRET (fluorescence resonance energy transfer) et finalement iii) une
approche biochimique in vitro d’expériences de coprécipitation et d’interaction protéine-protéine
par SPR (surface plasmon resonance) pour confirmer et caractériser l’interaction des
fragments de taline avec l’intégrine. La combinaison de ces trois approches nous a
permis i) de délimiter précisément un site d’interaction avec la sous-unité b3 de
l’intégrine aIIbb3 à une séquence de 42 acides aminés (résidus 2072 à 2113) au niveau
du domaine élongé de la taline, ii) de définir par SPR l’affinité pour b3 des fragments
de taline contenant le premier (KD=9,7 ± 1,6 x 10-6 s-1) ou le deuxième (KD=6,3 ±
6,2 x 10-4 s-1) site d’interaction avec b3, iii) de montrer que le résidu Tyr747 de
la partie cytoplasmique de b3 est important pour l’interaction avec le domaine élongé
de la taline, et iv) de souligner l’importance physiologique de cette interaction
en montrant par la technique du FRET qu’elle a effectivement lieu au sein des cellules.
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Documentation
