Note publique d'information : La complexité structurale des lipides et leur absence de chromophores rendent difficiles
leur séparation et leur détection en chromatographie liquide. L’objectif de cette
thèse est le développement d’une technique d’analyse qui soit à la fois discriminante,
sensible, rapide et efficace. La micro chromatographie liquide à haute température
(µHTLC) couplée à un détecteur évaporatif à diffusion de la lumière (DEDL) adapté
aux micros débits, a été mise en place sur carbone graphite poreux (PGC). Une étude
cinétique a mis en évidence le réel gain d’efficacité obtenu en µHTLC à des températures
d’analyses et des débits élevés. Cette technique permet de diminuer fortement les
temps d’analyses et d’améliorer la forme des pics d’élution. Une échelle de force
éluante a été établie en se basant sur l’étude de la sélectivité méthylène sur PGC
: l’augmentation de la température modifie la force éluante des solvants organiques,
permettant ainsi l’utilisation de solvants alcools, moins toxiques que ceux classiquement
utilisés dans l’analyse des lipides. Une application a été réalisée sur des mélanges
lipidiques complexes pour illustrer le potentiel de la µHTLC et du PGC dans la séparation
de ces espèces moléculaires. D’autre part, la µHTLC a été couplée au DEDL, à la spectrométrie
de masse et au détecteur à aérosol chargé (CAD), afin de positionner ce dernier en
terme de performances par rapport aux deux autres et d’étudier les effets de la µHTLC
sur la réponse des détecteurs. Enfin, concernant la modulation de la sélectivité par
la température, une étude a été réalisée sur l’analyse des triglycérides en mode isotherme
et gradient de température.
Note publique d'information : The structural complexity of lipids and their lack of chromophores make their separation
and their detection difficult in liquid chromatography. The aim of this thesis is
the development of an analysis technique which is at the same time discriminating,
sensitive, fast and efficient. The micro high-temperature liquid chromatography (µHTLC)
coupled with an evaporative light scattering detector (ELSD) adapted to micro flow
rates, was implemented on porous graphitized carbon (PGC). A kinetic study has highlighted
the real enhancement of efficiency obtained in µHTLC at elevated temperatures and
flow rates. This technique allows to strongly decrease analysis times and to improve
peaks shape. A scale of eluotropic strength was established on the basis of methylene
selectivity on PGC: increasing emperatures modify the eluotropic strength of organic
solvents which allows the use of alcohols solvents, less toxic that those classically
used in lipids analysis. An application was realized on complex mixtures of lipids
to illustrate the potential of the µHTLC and PGC in separation of these molecular
species. In addition, µHTLC was coupled with DEDL, mass spectrometer and aerosol charged
detector (CAD), in order to position this latter in term of performance compared to
the two others detectors and to study effects of µHTLC on detectors response. Finally,
concerning the modulation of the selectivity by temperature, a study was realized
based on analysis of triacylglycerols in isotherm and temperature gradient mode.
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