Identifiant pérenne de la notice : 247835544
Notice de type
Notice de regroupement
Note publique d'information : Bien que le virus de l'hépatite C ait été découvert en 1989, les mécanismes de sa
réplication restent mal connus. Nous avons donc développé un modèle cellulaire pour
l'étude de sa réplication. Les gènes codant pour les protéines non structurales du
virus ont été intégrés dans génome de cellules HuH7. L'activité du complexe de réplication
formé par ces protéines est mesurée à l'aide d'ARN rapporteur (mini-réplicons) dont
l'expression est dépendante de leur réplication par ce complexe. Ces ARN possèdent
le gène codant pour l'EGFP flanqué des régions 5' et 3' non traduites du virus. Lors
de la mise en place de ce système, nous avons pu montrer l'existence de régions promotrices
dans la séquence ADN correspondant au 5'UTR. D'autre part, nous avons pu mesurer des
événements de réplication après 40 jours de culture. Ce système devrait constituer
un modèle efficace pour étudier la réplication et tester de nouveaux inhibiteurs du
VHC.
Note publique d'information : Even through the hepatitis C virus was discovered since 1989, its replication is still
poorly known. Therefore, we established a cell based system to study its replication.
Genes coding for HCV non structural proteins were integrated into the HuH7 cell genome
in order to constitutively express the replication complex. To analyse its activity,
RNA reporter (mini-replicons) were constructed. They contain at both ends HCV untranslated
regions (5'UTR and 3'UTR). To quantify cells supporting RNA replication, we introduced
EGFP coding genes between 5'UTR and 3'UTR. Only cells able to support mini-replicons
replication will be fluorescent. During the development of this model, we demonstrated
that DNA sequence corresponding to the HCV 5'UTR contains a promoter activity. Moreover,
we could observe mini-replicons replication until 40 days of culture. This model will
be useful to study HCV replication and effect of new drugs on HCV RNA synthesis.