Identifiant pérenne de la notice : 247840238
Notice de type
Notice de regroupement
Note publique d'information : L'étude de l'ATPase pompe à protons (H#+-atpase) du tonoplaste d'acer pseudoplatanus
a nécessité la mise au point d'une nouvelle méthode pour l'isolement des vacuoles.
Les vacuoles sont préparées à partir des protoplastes; la rupture du plasmalemme est
obtenue par ultracentrifugation des protoplastes à l'intérieur d'un gradient discontinu
de densité. Deux populations de vacuoles distinctes par la densité et par la taille
sont ainsi séparées. La méthode proposée permet en une seule étape d'isoler les vacuoles
avec un rendement élevé (50%) et un bon degré de pureté. La contamination par les
autres compartiments cellulaires n'excède pas 5%. Le tonoplaste préparé à partir de
ces vacuoles constitue donc un bon matériel pour l'étude de ses constituants et de
l'H#+-ATPase en particulier. Les propriétés de l'H#+-ATPase du tonoplaste d'acer ont
été caractérisées tant du point de vue de l'hydrolyse de l'ATP que du transport des
protons. Comme les autres ATPases tonoplastiques, elle a un PH optimum de 7,3 et MGATP#2#
est son substrat. elle est sensible aux anions: stimulée par CL#, inhibée par NO#3#.
Elle se distingue toutefois des autres ATPases tonoplastiques par sa sensibilité au
vanadate (inhibiteur non-compétitif; I#5#0=10 M). Le vanadate est un composé décrit
comme un inhibateur spécifique de l'ATPase plasmique des plantes et des animaux et
des ATPases à intermédiaire phosphorile. Cette propriété de l'ATPase du tonoplaste
d'acer suggère que son mécanisme réactionnel pourrait faire intervenir un intermédiaire
phosphoryle au cours de l'hydrolyse de l'ATP.
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