Identifiant pérenne de la notice : 247840912
Notice de type
Notice de regroupement
Note publique d'information : LES LYSSAVIRUS (RAGE ET VIRUS APPARENTES) SONT DES VIRUS A ARN NEGATIF DONT LE GENOME
EST FLANQUE DE DEUX SEQUENCES PRECISES (LE LEADER ET LE TRAILER) QUI SONT INDISPENSABLES
A SA REPLICATION ET A SA TRANSCRIPTION. L'ENCAPSIDATION DU GENOME PAR LA NUCLEOPROTEINE
(N) AVEC LE COMPLEXE DE REPLICATION/TRANSCRIPTION VIRAL CONSTITUE PAR LA PHOSPHOPROTEINE
(P) ET LA POLYMERASE (L) EST SUFFISANTE POUR AMORCER LE CYCLE DU VIRUS. DANS LE CADRE
D'UN TRAVAIL VISANT A CREER UN OUTIL DE GENETIQUE INVERSE POUR LYSSAVIRUS, NOUS AVONS
CONSTRUIT UN VECTEUR PERMETTANT D'EXPRIMER UN MINIGENOME RABIQUE. CE MINIGENOME EST
COMPOSE D'UN ARN MESSAGER NEGATIF DE LUCIFERASE FLANQUEE PAR LE LEADER ET LE TRAILER
DU VIRUS DE LA RAGE. L'EXTREMITE 3 PRECISE DU LEADER EST OBTENUE PAR COUPURE DE L'ARN
PAR LE RIBOZYME DE L'HEPATITE DELTA (ARN AUTO CATALYTIQUE), DONT LA SEQUENCE A ETE
CLONEE EN AVAL DE CE MINIGENOME. CE MINIGENOME A ETE EXPRIME DANS LE CYTOPLASME DE
CELLULES DE MAMMIFERE PAR L'INTERMEDIAIRE DE L'ARN POLYMERASE DE T7. LA CO-EXPRESSION
DES PROTEINES VIRALES N, P ET L A PERMIS DE TRANS-COMPLEMENTER LE MINIGENOME. CE DERNIER
A ETE TRANSCRIT, DONNANT LIEU A UNE EXPRESSION SPECIFIQUE DE LUCIFERASE, REPLIQUE
ET A BOURGEONNE SOUS FORME DE VIRION POUVANT INFECTER D'AUTRE CELLULES. L'IMPORTANCE
DE L'EXTREMITE 5 DE L'ARN MINIGENOMIQUE A ETE MONTREE EN AMELIORANT L'EFFICACITE DE
LA TRANSCOMPLEMENTATION LORSQU'UN RIBOZYME TETE DE MARTEAU CLIVANT L'ARN EN 5 A ETE
INSERE DANS LE VECTEUR D'EXPRESSION. UN VECTEUR CASSETTE LYSSAVIRUS A ETE CREE EN
INTRODUISANT DES SITES DE RESTRICTION DANS LES RIBOZYMES. IL PERMET DE SOUS-CLONER
RAPIDEMENT DES SEQUENCES VIRALES DANS LE VECTEUR D'EXPRESSION, CE QUI FACILITERA L'ETUDE
FUTURE DES LYSSAVIRUS PAR GENETIQUE INVERSE. LA COMPLEMENTATION DE MINIGENOME RABIQUE
PAR VIRUS ASSISTANT RAGE, MOKOLA OU EBL-1 (LYSSAVIRUS TRES DIVERGEANTS DU VIRUS DE
LA RAGE) A PERMIS DE MONTRER QUE LES PROTEINES DU VIRUS MOKOLA SONT CAPABLES DE RECONNAITRE
LES SEQUENCES LEADER ET TRAILER DU VIRUS DE LA RAGE, MAIS PAS CELLES DU VIRUS EBL-1.
UN OUTIL DE GENETIQUE INVERSE VALABLE POUR TOUS LES LYSSAVIRUS A AINSI ETE CREE, IL
OUVRE DE NOMBREUSES PERSPECTIVES EN PARTICULIER POUR L'ETUDE FONCTIONNELLE DE PROTEINES
VIRALES MUTANTES, L'ETUDE DES SEQUENCES CIS-REGULATRICES ET A TERME L'OBTENTION DE
LYSSAVIRUS INFECTIEUX A PARTIR DE CADN.
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