Note publique d'information : Staphylococcus aureus est une bactérie commensale de la peau capable de rapidement
développer ou acquérir de multiples résistances aux antibiotiques. Elle est responsable
de 16% des infections nosocomiales ce qui en fait un problème majeur de santé publique
dans le monde. Sa virulence est multifactorielle et fait intervenir des protéines
et des ARN régulateurs. L’un d’entre eux, l’ARN SprC, diminue la virulence et l’internalisation
de S. aureus par les monocytes et les macrophages humains (Le Pabic et al., 2015).
Le Pabic et al. ont montré que SprC interférait avec la phagocytose de S. aureus en
partie par son contrôle de l’expression de l’Autolysine (Atl), une protéine impliquée
dans l’internalisation de S. aureus. En effet, SprC régule négativement la production
de l’Atl en bloquant la traduction de son ARNm par inhibition directe. Cependant,
cette interaction entre SprC et l’ARNm de l’atl est faible (Kd = 35µM) suggérant l’intervention
de partenaires supplémentaires dans cette interaction. Afin d’identifier de nouveaux
partenaires protéiques et ARN de SprC, une technique de chromatographie d’affinité
a été mise au point. Elle met en jeu l’ARN SprC fusionné à un tag MS2 lui permettant
de se fixer à une résine d’amylose par l’intermédiaire de protéines MPB-MS2. La méthode
a été validée par qPCR en utilisant un contrôle interne, l’ARNm rot connu pour se
fixer à l’ARNIII. Enfin, après l’isolement des ARN se fixant à SprC, ces derniers
ont été séquencés par RNAseq et les reads ont été alignés sur un génome de référence.
L’analyse des niveaux d’expression du RNAseq a permis d’identifier 4 ARN candidats
se fixant à SprC. L’analyse protéomique des partenaires de SprC a également permis
l’identification la protéine ribosomale S2 se fixant fortement à SprC, et dont la
validation de l’intercation est en cours. Le rôle de ces partenaires dans la virulence
de S. aureus sera étudié dans le but de développer de nouvelles thérapies anti-staphylococciques.
Note publique d'information : Staphylococcus aureus is a commensal bacterium of the skin able to quickly develop
or acquire multiple resistances to antibiotics. It is responsible for 16% of nosocomial
infections that make it a major public health issue worldwide. Its virulence is multifactoral
and involves proteins and regulatory RNAs. One of them, the SprC RNA, decreases virulence
and S. aureus internalisation by human monocytes and macrophages (Le Pabic et al.,
2015). Le Pabic and al., showed that SprC interferes with S. aureus phagocytosis in
part by monitoring expression of the Autolysin (Atl), a protein involved in S. aureus
internalisation. The author demonstrated that SprC negatively regulates Atl production
by blocking translation of its mRNA through direct inhibition. However, interaction
between SprC and the atl mRNA is weak (Kd = 35µm), which suggested the involvement
of additional partners. In order to identify new proteins and RNA partners of SprC,
an affinity chromatography technique has been developed. It involves the SprC RNA
combined to a MS2 tag allowing it to bind to an amylose resine through a MBP-MS2 protein.
The method has been validated by qPCR using an internal control, rot mRNA that is
known to bind RNAIII. Then, following the isolation of RNA bound to SprC, the latter
were sequenced by RNAseq and reads aligned on to a reference genome. Analysis of RNAseq
expression level led to the identification of 4 RNA candidates bound to SprC. Proteomic
analyses of SprC partners also allowed the identification of ribosomal protein S2
which strongly which strongly bind to SprC, and whose interaction validation is in
progress. The functions of these partners in S. aureus virulence will be subsequently
study in order to develop new anti-staphylococcal therapies.
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