Note publique d'information : Apres une infection microbienne, l'activation de la réponse immunitaire innée dans
l'hémolymphe des insectes implique principalement deux familles de protéines: les
récepteurs qui interagissent spécifiquement avec des motifs moléculaires à la surface
de l'intrus, et les protéases à serines qui amplifient et régulent le signal par des
cascades protéolytiques. J'ai utilisé différents systèmes d'expression (bactérie,
levure, cellules d'insectes) pour produire quatre clip-trypsines de la drosophile
afin de résoudre leur structure cristallographique. Ces protéases à serines de type
trypsine possèdent au moins un court domaine N-terminal riche en cystéines, appelé
‘clip' et responsable de la régulation de l'enzyme. Le meilleur résultat a été obtenu
avec les cellules SF9 qui expriment et sécrètent correctement la clip-trypsine CG9733.
D'autre part, le domaine clip de CG16705 a été renaturé à partir de corps d'inclusion
exprimés dans la bactérie.Dans le contexte d'une collaboration avec le laboratoire
IBMC (Strasbourg) j'ai exprimé le récepteur PGRP-SD dans des cellules S2 et résolu
sa structure cristallographique. Cette protéine de reconnaissance du peptidoglycane
(PGRP) isolé chez la drosophile est un récepteur des bactéries Gram+, comme PGRP-SA.
Les résultats suggèrent toutefois que les deux récepteurs reconnaissent différemment
le peptidoglycane de ces bactéries, et qu'ils interagissent avec des corécepteursdifférents.
Bien que le site de fixation du peptidoglycane soit conservé, la comparaison des structures
de PGRP-SA et PGRP-SD montre des changements importants dans son environnement proche,
en particulier dans la répartition des charges électrostatiques. De plus l'analyse
des résidus de surface met en évidence une région non conservée entre les deux récepteurs
et probablement impliquée dans l'interaction avec un co-récepteur, ainsi qu'une crevasse
hydrophobe conservée chez toutes les PGRP
Note publique d'information : Upon microbial infection, the activation of innate immunity in the hemolymph of insects
involves principally two protein families: receptors which interact with specific
molecular patterns on microorganisms, and serine proteases which amplify and regulate
the signal through proteolytic cascades. I used different expression systems (bacteria,
yeast and insect cells) to produce four drosophila clip-trypsins in order to solve
their crystallographic structure. These trypsin-like serine proteases have at least
one small N-terminal cysteine-rich domain called ‘clip' which is involved in the regulation
of the enzyme. The best result was obtained with SF9 cells which expressed and properly
secreted the clip-trypsin CG9733. The clip domain of CG16705 was also refolded from
inclusion bodies expressed in bacteria. In collaboration with the laboratory IBMC
(Strasbourg), I expressed the receptor PGRP-SD in drosophila S2 cells and solved its
crystallographic structure. This peptidoglycan recognition protein (PGRP) from drosophila
is a receptor for Gram+ bacteria, as PGRP-SA, but the data suggest they recognize
different bacteria and interact with different co-receptors. Although the peptidoglycan
binding site is conserved, the comparison of PGRP-SD and PGRP-SA structures reveals
some differences, especially in the surface charge distribution. Furthermore, the
analysis of surface residues highlights two regions: one that is not conserved between
the two receptors and probably interacts with co-receptors, the other, a hydrophobic
crevice that is highly conserved across the PGRP family
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